在生物医疗研究与生物技术应用中，细胞活率的鉴定是一个至关重要的环节。无论是细胞培养、药物筛选，还是细胞治疗产品的质量控制，准确评估细胞活性都是实验成功的关键。提到细胞活率检测，很多人首先想到的是经典的台盼蓝染色法，因为它操作简单、成本低廉，是实验室的“标配”方法。
然而，台盼蓝染色法并非完美无缺，它只能反映细胞膜的完整性，无法揭示细胞的代谢状态，且对细胞有一定毒性，长时间染色可能影响细胞活性，操作过程中也可能存在误差。那么，除了台盼蓝，还有哪些方法可以更全面、更精准地鉴定细胞活率呢？本文介绍四种常用的细胞活率检测技术，并深入分析它们的优缺点，帮助大家根据不同实验更好地选择不同的计数方法。
CCK-8试剂（Cell Counting Kit-8细胞计数试剂）中含有WST–8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二硫基苯)-2H-四唑单钠盐），这是一种淡黄色水溶性染料，能够在活细胞的线粒体内被脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜。通过测定甲臜的吸光度，可以间接反映细胞活率和增殖能力。
优点：灵敏度高，适合高通量筛选，还能反映细胞的代谢活性，而不仅仅是细胞膜的完整性。
不足：需要特定的仪器（如酶标仪）来测定吸光度，实验步骤较多，耗时较长（15h-4h）。
此方法使用荧光染料（如PI碘化丙啶、Calcein-AM）标记细胞。PI只能进入死细胞，并与DNA结合后发出红色荧光，而Calcein-AM在活细胞代谢后发出绿色荧光。通过荧光显微镜或流式细胞仪检测，可以有效区分活细胞与死细胞。
优点：灵敏度高，结果准确，并可与流式细胞仪结合进行高通量分析，适合复杂样本的检测。
不足：需要昂贵的仪器，荧光染料可能对细胞有毒性，操作相对复杂，更适合有经验的实验人员。
ATP（三磷酸腺苷）是细胞能量的直接来源，活细胞中的ATP含量较高而死细胞则极低。通过检测细胞中ATP的含量，可以间接反映细胞活率。
优点：灵敏度极高，可以检测微量细胞，结果快速，适合高通量筛选，并能够反映细胞的代谢状态。
不足：需要特定的试剂盒和仪器（如化学发光仪），成本较高，不适合大规模使用，且对样本处理要求较高，操作过程中需避免ATP降解。
克隆（集落）用于评估细胞的增殖能力、侵袭性以及对杀伤因素的敏感性。在该实验中，细胞克隆形成率，即细胞接种后的存活率，是衡量接种细胞成活并形成克隆数量的重要指标。值得注意的是，并非所有贴壁细胞都能增殖并形成克隆，只有既贴壁又具有增殖活力的细胞才能如此。当单个细胞在体外增殖超过六代后形成的细胞群体被称为克隆，通常每个克隆包含50个或更多的细胞。通过计算克隆形成率，可以对单个细胞的增殖潜力进行定量分析。
此实验常用的方法包括平板克隆形成试验和软琼脂克隆形成试验，尤其在抗肿瘤药物敏感性试验和肿瘤放射生物学试验中应用广泛。克隆形成率反映了细胞群体的依赖性和增殖能力这一重要性状。
细胞活率的鉴定是生物医疗实验中的基础环节，而选择合适的方法至关重要。每种方法都有其独特的优势和局限性，实际应用时应根据实验需求、设备条件和样本特性灵活选择。无论您在实验中更倾向于使用哪种方法，尊龙凯时都期待您的经验分享，以推动生命科学领域的进步。