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GPCR19激动剂操作规程 - 尊龙凯时生物医疗应用

发布时间:2025-03-24 发布人:尊龙凯时编辑

尊龙凯时 GPCR19激动剂(TGR5受体激动剂)操作规程主要包括以下步骤:

GPCR19激动剂操作规程 - 尊龙凯时生物医疗应用

第一步:细胞准备
在96孔板中,每孔加入100μL细胞悬液。细胞增殖实验一般每孔放置2000个细胞,而细胞毒性实验则需添加5000至10000个细胞(具体数量应根据细胞的大小和增殖速度进行调整)。随后,将板放置在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

第二步:化合物处理
向每孔中添加适当浓度的测试化合物,量为0~10μL。

第三步:孵育
将96孔板在37℃、含5% CO2和100%湿度的条件下,孵育足够的时间。

第四步:MTT溶液准备
将5×MTT用稀释液稀释至1×MTT溶液。

第五步:MTT反应
每孔加入50μL的1×MTT溶液,在37℃孵育4小时,以使MTT还原为甲臜。

第六步:溶解处理
吸出上清液后,每孔添加150μL DMSO,以溶解甲臜,并在摇床上摇匀。

第七步:测定光密度
使用酶标仪在570nm波长下检测每孔的光密度(如没有570nm滤光片,可选用560-600nm的滤光片)。

第八步:结果分析
a. **细胞存活率计算**:将每个测试孔的OD值减去背景OD值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD值(*培养基加不同稀释度的受试药物加MTT,无细胞),各重复孔的OD值取平均值±标准差。细胞存活率用T/C%表示,其中T为加药细胞的OD值,C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。
b. **药物浓度计算**:计算T/C=50%时的药物浓度(IC50)及T/C=10%时的药物浓度(IC90)。

通过严格遵循上述操作规程,可以有效评估尊龙凯时 GPCR19激动剂的生物活性,促进生物医疗领域的研究进展。