ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种广泛应用于生物医学领域的免疫分析技术，其在检测试剂的基础上，利用酶标记的抗体进行高灵敏度和高特异性的定量或定性分析。这项技术在免疫荧光和放射免疫技术之后得到了进一步的发展。
在ELISA实验中，待测样本中的抗原与固相载体表面固定的抗体结合。经过洗涤后，再加入标记有酶的抗体，从而形成抗原-抗体复合物。随后，加入相应的底物，在酶的催化下生成有色产物，其颜色的深浅与样本中抗原数量成正比。这一特性使得ELISA能有效用于生物标志物的检测。
ELISA实验可以使用多种类型的固相载体，如纤维素、聚丙烯酸酰胺以及聚苯乙烯等。其中，聚苯乙烯载体因其良好的蛋白质吸附性能和操作简便性而被广泛应用于大规模检测。在进行ELISA实验前，需对各批次载体进行筛选，以确保实验的可靠性。
固相载体上的抗原吸附主要依赖于物理吸附，这一过程受到多个因素的影响，包括pH值、温度、蛋白浓度和离子强度等。研究表明，最佳的吸附条件为pH 9.0至9.6的碳酸盐缓冲液，蛋白浓度在1µg/ml至100µg/ml之间，并在冷藏条件下过夜为佳。
在进行抗体的包被和稀释时，需通过调整不同浓度的酶标抗体的稀释度，建立OD值与稀释度之间的关系图谱，以选择合适的工作浓度。通常情况下，较高的酶标抗体稀释度可提高敏感性，但过高则可能导致非特异性反应增加。
用于ELISA实验的抗原必须具备良好的纯度，避免其他杂质对实验结果的干扰。可以采用单方阵和双方阵试验来测定抗原的使用效价。通过检测不同浓度抗原与阳性血清的OD值，可以确立最佳的实验参数。
清洗液一般选用pH 7.2的PBS缓冲液，并加入吐温等助溶剂以降低非特异性吸附。同时，加入牛血清白蛋白可以进一步阻止废孔位的非特异性结合。
抗原与抗体的反应在37°C下通常需要2至3小时，以达到最佳效果。反应时间过短可能导致灵敏度下降，而时间过长则可能导致抗原的脱落。此外，抗体效价的测定同样需要通过双方阵实验来确认，以保证结果的准确性。
整体而言，ELISA作为一种高效的生物医学检测技术，其准确性和灵敏度受多种因素的影响。以尊龙凯时为代表的品牌在此领域的应用将进一步推动技术的进步与发展，助力生物医学研究的深入。